KURSUS TEKNIK BIOLOGI MOLEKULER DAN 
                                                           MIKROTEKNIK 
                      Di Laboratorium Biologi Molekuler, Histologi dan Biologi Sel, Fakultas Kedokteran UGM. 
                                                      Dewi Marbawati*, Endang Setiyani* 
             Kegiatan kursus  dilaksanakan selama 4  hari                      ethanol) 
     dibagi  menjadi  2  bagian.  Dua  hari  pertama.  adalah                  Menyimpan  DNA  dalam  larutan  fisiologis 
                                                                               (misal 
     pelatihan Teknik Biologi Molekuler dilanjutkan dengan                            TE, H 0) 
     kursus Mikroteknik pada 2 hari berikutnya. Kegiatan                                    2
                                                                               Kemajuan dramatis di bidang biologi molekuler 
     kursus  diikuti  oleh  peneliti  dan  klinisi  pada bidang       dipicu dengan penemuan monumental reaksi berantai 
     kedokteran  sehingga  dapat  diaplikasikan  pada                 polimerasi materi genetis secara in vitro,  yang populer 
     penelitian,  pengajaran  dan pelayanan  kedokteran  di           disebut PCR. Di dalam reaksi PCR, diperlukan DNA, 
     Indonesia.  Kursus  diikuti  oleh  peserta dari  berbagai        dNPTs,  enzim  polimerase,  bufer,  dan  pencetak 
     instansi  seperti  Universitas  Gajah  Mada  (UGM),              (primers).  Ada 3  langkah  utama  dalam  reaksi  PCR, 
     Universitas  Diponegoro (UNDIP),  Universitas  Islam             dimana langkah  langkah tersebut diulang dalam 30  40 
     Negeri (UIN) Yogyakarta,  Universitas Sultan Agung               siklus. Teknik ini dilakukan oleh suatu automated cycler 
     Semarang, berbagai UPT Badan Litbang Depkes seperti              dimana tube berisi DNA dan campuran reaksi PCR akan 
     Lokalitbang Banjarnegara, Loka Litbang Ciarnis, dsb.             mengalami pemanasan dan pendinginan dalam waktu 
             Kursus  teknik  Biologi  Molekuler  menitik              yang sangat singkat.  Langkah  langkah  reaksi  PCR 
     beratkan pada teknik dasar Biologi molekuler, seperti            adalah: 
     isolasi DNA darah, PCR (Polymerase Chain Reactions)                       Denaturasi, umumnya dilakukan pada suhu 94 
     , RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism),                        98°C. Selama denaturasi double stranded DNA 
     Elektroforesis,  Sequencing  DNA  serta  penelusuran                      akan  meleleh  dan  terpisah  menjadi  single 
     gene bank melalui internet. Teknik biologi molekuler                      stranded  DNA,  reaksi  enzimatis  lain  akan 
     merupakan  alat  yang  penting  untuk  membedakan                         terhenti  (misal  reaksi  ekstensi  dari  siklus 
     organisme  atau  mikroorganisme  walau  hanya                             sebelumnya). 
     menunjukkan perbedaan susunan genetik yang sangat                         Annealing,  umumnya  dilakukan  pada  suhu 
     kecil. Hal ini dapat merupakan alat yang memberikan                       sekitar 54°C (37  65°C). Pada tahap ini primer 
     pandangan yang lebih realistik di bidang ilmu dasar dan                   akan menempel pada urutan basa yang sesuai 
     aplikasi kesehatan masyarakat khususnya dalam studi                       template  dan  enzym  polymerase  dapat 
     spesiftk yang mentargetkan gen atau rnikroorganisme                       menempel dan mengkopi template. 
     tertentu pada studi  epidemiologi  akibat kelainan gen                    Extension,  umurnnya  dilakukan  pada  suhu 
     tertentu pada individu.                                                   72°C. Suhu annealing adalah suhu yang ideal 
             Praktek  Isolasi  DNA,  PCR  dan  RFLP                            bagi  aktivitas  polymerase.  Basa  yang 
     (inkubasi) dipandu oleh Ibu SusannaH Hutajulu dengan                      complementary  terhadap  template  akan 
     dibantu  oleh  beberapa  asisten  dilaksanakan  di                        berpasangan dengan primer. 
     laboratorium Biomelekuler. Dalam prakteknya peserta                       Reaksi  PCR bekerja pada kondisi  terkontrol 
     melakukan  pengambilan  reagenlbahan  (hand's  on).              dengan mentargetkan pada susunan nukleotida tertentu 
     Prinsip dalam proses megekstraksi DNA dari sampal                pada gen yang menjadi tempat hibridisasi dan sekaligus 
     darah adalah :                                                   awal reaksi pencetakan, sehingga dihasilkan potongan 
             Disrupsi  sel  untuk mengeluarkan kandungan              gen dengan panjang tertentu yang secara teoritis bisa 
     kandungannya ( dilakukan dengan cara buffer lis is dan           dihitung ukuran panjangnya. 
     sentrifugasi)                                                    Tahapan PCR dilanjutkan dengan elektroforesis yang 
             Membuang  komponen  komponen  non  asam                  menggunakan  medium  terpisah  (agarose, 
             nukleat  (rnisal  protein  dan  debris)  sehingga        polyacrilamide).  Dengan  menjalankan  mesin 
             hanya  tinggal  DNA yang tersisa.  Dilakukan             elektroforesis dari muatan negatifke positif, DNA akan 
             dengan  sentrifugasi,  secara  enzimatik                 terpisah  berdasarkan  ukuran  fragmen-fragmennya. 
             (proteinase, RNAse), phenol, chloroform, SDS             Hasil  elektroforesis dapat dilihat dibawah sinar Ultra 
             (sodium dodecyl sulphat).                                Violet(UV). 
             Mengkonsentrasikan DNA (presipitasi dengan                        Kursus  Mikroteknik  bertujuan  memberikan 
       *Staf Loka Litbang P2B2 Banjarnegara 
                                                                                                                             11